人源OAT1-MRP2-UGT2B7三重稳定转染细胞株及其构建方法

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摘     要：本发明涉及一种人源OAT1‑MRP2‑UGT2B7三重稳定转染细胞株的构建方法及功能验证：将hOAT1的目的基因与pcDNA3.1/Hygro(+)表达载体组装，hMRP2的目的基因与pcDNA3.1/G418(+)表达载体组装，hUGT2B7的目的基因与pcDNA3.1/Puromycin(+)表达载体组装，构建pcDNA3.1/Hygro(+)‑hOAT1质粒、pcDNA3.1/G418(+)‑hMRP2质粒和pcDNA3.1/Puromycin(+)‑hUGT2B7质粒；其中，hOAT1、hMRP2和hUGT2B7目的基因的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1‑3所示；采用脂质体法将构建的三种质粒依次转染至MDCKII细胞、Caco2细胞或HEK293细胞，分别使用特异抗生素筛选出阳性克隆，并通过使用阳性化合物进行转运或代谢功能验证，确认细胞株同时稳定表达OAT1、MRP2和UGT2B7基因及其蛋白。本发明的三重稳定转染细胞株可用于模拟肝内OAT1介导的摄取、MRP2介导的外排及UGT2B7介导的二相代谢功能，是评价药物处置机制的重要体外研究手段。

• 1． 买家选定所需专利，确认国家手续办理方，下单，确认交易合同；
  2． 卖家确认专利可交易；
  3． 买家支付交易款项到平台；
  4． 买卖双方签订《专利转让委托书》、《转让协议》、《解除代理委托书》各一式两份并提交给办理国家手续方；
  5． 办理国家手续方提交办理官方手续，国家知识产权局1个月左右下发《著录项目变更手续合格通知书》；
  6． 买家确认收到《专利证书》、《著录项目变更手续合格通知书》；
  7． 平台把交易款项支付给卖家，至此专利转让合同完成。
  

• 交易方	企业	个人
  买家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（签字）
  	专利转让委托书（需盖公章）一式两份	专利转让委托书（需签字）一式两份
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  卖家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（需申请人签字）
  	解除代理委托书（需盖公章）一式两份（如专利通过代理机构申请）	解除代理委托书（需签字）一式两份（如专利通过代理机构申请）
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  	专利请求书或手续合格通知书、授权通知书复印件	专利请求书或手续合格通知书、专利授权通知书复印件
  	专利证原件（若授权下证）	专利证原件（若授权下证）

• 日期	法律信息	备注
  2021/03/12	授权
  2019/05/14	实质审查的生效	IPC(主分类): C12N 15/85 专利申请号: 201811642796.5 申请日: 2018.12.29
  2019/04/19	公开