利用CRISPR/Cas9系统构建的基因条件性敲除方法

摘     要：本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9系统构建的基因条件性敲除方法：在待敲除区域左侧和右侧分别选取LoxP‑抗生素‑LoxP和FRT‑抗生素‑FRT‑LoxP序列插入位点；在待插入位点的上下游选取左右同源臂，扩增并纯化，酶切、连接和转化，从而得到包含左侧打靶质粒和右侧打靶质粒；将Cas9质粒、敲除区域左侧或右侧打靶质粒，及其相对应的gRNA表达质粒顺序导入或同时导入目的细胞中，转染后用抗生素筛选，筛选出同时插入了左侧和右侧打靶序列的目的细胞；用4‑OHT和DOX分别诱导Cre‑LoxP和FLP‑FRT介导的同源重组，从而在待敲除区域的左侧和右侧导入loxp位点；用4‑OHT诱导Cre‑LoxP介导的同源重组，得到目的片段敲除的克隆。

著 录 项： 

• 1． 买家选定所需专利，确认国家手续办理方，下单，确认交易合同；
  2． 卖家确认专利可交易；
  3． 买家支付交易款项到平台；
  4． 买卖双方签订《专利转让委托书》、《转让协议》、《解除代理委托书》各一式两份并提交给办理国家手续方；
  5． 办理国家手续方提交办理官方手续，国家知识产权局1个月左右下发《著录项目变更手续合格通知书》；
  6． 买家确认收到《专利证书》、《著录项目变更手续合格通知书》；
  7． 平台把交易款项支付给卖家，至此专利转让合同完成。
  

• 交易方	企业	个人
  买家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（签字）
  	专利转让委托书（需盖公章）一式两份	专利转让委托书（需签字）一式两份
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  卖家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（需申请人签字）
  	解除代理委托书（需盖公章）一式两份（如专利通过代理机构申请）	解除代理委托书（需签字）一式两份（如专利通过代理机构申请）
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  	专利请求书或手续合格通知书、授权通知书复印件	专利请求书或手续合格通知书、专利授权通知书复印件
  	专利证原件（若授权下证）	专利证原件（若授权下证）

• 日期	法律信息	备注
  2020/07/31	授权
  2018/09/18	实质审查的生效	IPC(主分类): C12N 15/90 专利申请号: 201810300747.7 申请日: 2018.04.04
  2018/08/24	公开