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本发明公开了一种克唑替尼手性中间体的制备方法及菌株，所述方法以白地霉(Geotrichum candidum)ZJPH1704经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以2,6‑二氯‑3‑氟苯乙酮为底物，以甘油为辅助底物，以pH 6～9的缓冲液为反应介质构成反应体系，在25～50℃、150～250rpm条件下进行反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得(S)‑1‑(2,6‑二氯‑3‑氟苯基)乙醇；本发明利用白地霉ZJPH1704，制备所得产物的光学纯度高，可使反应产率提高至93％，e.e.值>99.9％。

本发明利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811静息细胞为催化剂，通过催化1‑(4‑三氟甲基苯基)乙酮生物还原制备(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，为不同种类微生物催化制备趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇方面提供了有益的参考；本发明利用生物催化方法得到产物(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，与已报道的化学合成路线相比，该工艺的过程简单，环境友好，生物催化剂为微生物菌体，成本低廉。

本发明为一种利用土星轮头酵母制备(R)‑1‑(4‑溴苯基)‑2,2,2‑三氟乙醇的方法，以土星轮头酵母(Cyberlindnera saturnus)ZJPH1807菌株经发酵培养获得的湿菌体为酶源细胞，以4'‑溴‑2‑2‑2‑三氟苯乙酮为底物，以pH值6.0～8.0的0.1M缓冲液为反应介质构成转化体系，在30℃、200rpm条件下转化6～48h，反应结束后，获得含式(Ⅰ)所示(R)‑1‑(4‑溴苯基)‑2,2,2‑三氟乙醇的转化液。本发明利用土星轮头酵母ZJPH1807菌株静息细胞为催化剂，生物催化4'‑溴‑2‑2‑2‑三氟苯乙酮不对称还原获得相应的(R)‑1‑(4‑溴苯基)‑2,2,2‑三氟乙醇，该方法具有立体选择性高，反应条件温和等优点。当底物浓度为1.25g/L时，产率达74.52％，e.e.值为94.08％。

本发明提供一种利用膨大弯颈霉(Tolypocladium inflatum)ZJPH2105菌株在不对称还原芳香酮制备手性芳香醇中的应用。此方法利用膨大弯颈霉ZJPH2105菌株催化获得的产物e.e.值>99.9％，且该菌株绿色安全，易培养，来源丰富，转化过程中不需要添加昂贵的辅酶，具有成本低，转化过程绿色和环境友好等特点。本发明通过利用膨大弯颈霉(Tolypocladium inflatum)ZJPH2105菌体细胞为生物催化剂对4'‑溴‑2,2,2‑三氟苯乙酮进行还原，当底物浓度为10mM时，目的产物(S)‑1‑(4‑溴苯基)‑2,2,2‑三氟乙醇的产率可达98.2％，e.e.值>99.9％。

本发明提供一种咪康唑手性中间体的生物合成方法，所述的方法为：以土星轮头酵母(Cyberlindnera saturnus)ZJPH1807经发酵培养获得的湿菌体为酶源，以2‑氯‑1‑(2,4‑二氯苯基)乙酮为底物，于pH 6.0～8.0的PBS缓冲液中构成转化体系，在20～45℃、200rpm条件下转化2～24h，反应结束后将转化反应液用乙酸乙酯进行萃取，取有机相，即得含有所述咪康唑手性中间体的乙酸乙酯溶液，本发明利用土星轮头酵母ZJPH1807菌株静息细胞为催化剂，生物不对称还原2‑氯‑1‑(2,4‑二氯苯基)乙酮获得相应的(R)‑2‑氯‑1‑(2,4‑二氯苯基)乙醇。利用该菌株制备所得产物的光学纯度高，ee值>99.9％。

本发明涉及属于基因工程和酶工程领域，本发明利用基因工程和定点突变的方法，将来源于近平滑假丝酵母（保藏号ATCC7330）的羰基还原酶进行表达，并开展定点突变，获得羰基还原酶的酶活力提高6倍的突变体A121N，为利用羰基还原酶或其突变体酶还原苯乙醛制备2‑苯乙醇提供了酶源。在此基础上，本发明以苯乙醛为原料，利用葡萄糖脱氢酶与羰基还原酶耦合，原位再生辅酶NADPH，催化反应后采用超滤设备分离浓缩回收酶，可以实现酶回收5次以上，极大降低2‑苯乙醇的制备成本，在优化工艺下，管式反应转化率达到90%以上，间歇式反应转化率可达到80%以上。

本发明公开了一种超临界CO2/缓冲溶液双相体系酶法制备(R)‑1‑苯基‑1,2‑乙二醇的方法，以绿豆水解酶为催化剂催化环氧苯乙烷发生不对称水解反应，以超临界CO2和Tris缓冲溶液为双相体系，以碳酸氢钠为pH稳定剂，一次性或间歇分步加入Tris‑HCl缓冲溶液的过程制备产物。本发明方法的体系能有效抑制底物自催化水解反应并提高底物浓度，且反应过程不添加有机溶剂，具有环境污染小，CO2价格低，产物易分离的优势；间歇分步加入Tris‑HCl缓冲溶液的过程也能有效抑制底物自催化水解反应并提高ee值；本发明方法制得的产物ee值达97％以上，收率超49％。