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本发明提供了一种基于微流体聚集鱼肉鲜度检测纸基芯片的制作和检测方法,该利用不同分子量的多糖逐层修饰于硝酸纤维素膜，修饰后的硝酸纤维素膜具备膜多孔结构‑大分子量孔隙‑小分子量孔隙结构进而形成微流体聚集效应。通过将黄嘌呤氧化酶（XOD）和辣根过氧化物酶（HRP）固定在硝酸纤维素膜上，并联用3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺（TMB）作为显色剂，制备成纸基芯片，实现对鱼肉中次黄嘌呤的检测。将纸基芯片直接贴于水产品表面，鱼肉表面的基液会通过不同孔径形成微流体并聚集到固定化酶位置，从而实现次黄嘌呤的直接检测，而由于不同分子量多糖修饰层孔径的不同，蛋白质等干扰基质组分会被截留，减少基质的干扰，从而实现对水产品新鲜度的肉眼直接检测。