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本发明公开了一种双荧光法筛选β‑丙氨酸合成酶的方法，将荧光报告基因与β‑丙氨酸合成酶基因共同导入宿主菌中，接种含阿拉伯糖的基本盐培养基，在30～37℃诱导培养后，获得发酵液；取发酵液冻融破胞，取破胞液即为粗酶液；取粗酶液加入L‑天冬氨酸，于37℃条件下静置2h进行转化反应将底物转化为β‑丙氨酸，取转化液在吸收波长355nm和发射波长445nm的条件下测定荧光值；取发酵液在吸收波长395nm和发射波长509nm的条件下测定荧光值，筛选获得高活力β‑丙氨酸合成酶；本发明体系操作简便、酶活测量稳定、酶活检测灵敏度高等优点，在β‑丙氨酸合成酶定向改造方面具重要的应用价值。