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本发明公开了一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用，所述重组共表达载体以质粒pET‑28b、质粒pETDuet‑1或质粒pCDFDuet‑1为基础，包含核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示醛酮还原酶突变体基因和核苷酸序列为SEQ ID NO：3所示葡萄糖脱氢酶基因。本发明方法在双酶分开单独表达后组合催化方法的最大底物投料量50g/L(已在专利申请(201610124451.5)中公开)的基础上进一步提高到60g/L以上，同时双酶共表达体系有利于全细胞固定化，更具工业化应用前景。

本发明公开了一种穿梭质粒载体及其构建方法和应用，所述穿梭质粒载体是将枯草芽孢杆菌质粒pWB980线性化后插入到载体pMD19‑T Simple Vector中构建而成。本发明提供的穿梭载体质粒可在大肠杆菌和多粘类芽孢杆菌中复制。多粘类芽孢杆菌中遗传操作体系尚不成熟、转化步骤较繁琐，且其转化效率相对较低，而大肠杆菌中基因克隆操作十分便利。利用该质粒载体在大肠杆菌中完成外源基因克隆和重组质粒构建工作，便于多粘类芽胞杆菌中开展相关基因功能研究和遗传育种工作，转化率可达7.83±1.54×105CFU/ug DNA。

本发明公开了实现转基因家蚕杂交一代生殖细胞外源DNA自动删除的重组表达载体及其制备方法和应用，首先构建由家蚕生殖腺特异表达基因启动子调控GAL4基因表达的转基因激活载体和由UAS元件调控下游FLP基因表达的转基因效应载体，然后将转基因激活载体和效应载体分别转化家蚕并筛选单拷贝转基因家蚕建立激活系和效应系，再将激活系与效应系家蚕杂交获得双转基因杂交一代家蚕，最终获得基因组中不含目标外源DNA序列的后代家蚕，从而既可实现外源有益蛋白在转基因家蚕特定组织或器官中的表达，又可避免转基因在后代蚕种保留所带来的生物安全隐患。

本发明涉及家蚕核型多角体病毒诱导型39K启动子及其重组载体和应用，该启动子是以BmNPV延迟早期基因39K的启动子最优序列作为“母体”启动子，逐步截短分析降低启动子长度，构建重组启动子，仍具有很强的BmNPV诱导启动活性，并验证家蚕核型多角体病毒立即早期基因IE‑1蛋白可以转录结合39K(‑310～‑355)区域诱导39K启动子表达，我们利用该区域构建了不同的人工合成诱导型启动子，能够高效提高39K及其他不同启动子诱导表达活性，该人工合成诱导型启动子不但适用于基因功能分析等分子生物学理论研究和家蚕核型多角体病毒表达系统应用研究，同时适用于利用基因工程技术进行的家蚕品种改良。

本发明公开了一种鱼类促卵泡激素体细胞基因转移载体及其构建方法和应用，属于生物工程技术领域，所述鱼类促卵泡激素体细胞基因转移载体采用引物搭桥法进行构建，具体为，将斜带石斑鱼促卵泡激素beta亚基和alpha亚基连接在人绒毛膜促性腺激素的羧基末端形成单链形式的FSHbeta‑CTP‑alpha目的碱基序列片段，将该目的碱基序列片段整体插入pcDNA3.1/Zeo(+)空载质粒的多克隆位点上。本发明的有益之处在于：利用体细胞基因转移技术将鱼类自身的促卵泡激素基因导入鱼体中使其表达，能够诱导斜带石斑鱼早期卵巢发育，效果明显，诱导效率达到85%左右。

本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e3的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTRV2e3。本发明还同时提供了利用pTRV2e3制备能同时表达GFP和RFP的病毒TRVe3‑rfp‑gfp的方法，病毒TRVe3能在寄主植物中持续稳定高含量表达两个非融合的目的蛋白。

本发明公开了由人血白蛋白启动子驱动的用于在细胞中表达白蛋白基因的载体，并在细胞中成功高效表达外源白蛋白。该表达载体由骨架和装载于骨架上的表达框组成，该表达框由人血清白蛋白启动子及其第一个内含子、白蛋白基因、内核糖体进入位点序列(IRES)和标记基因组成。该载体中人血白蛋白启动子和IRES序列驱动白蛋白基因和标记基因同时表达。利用该载体在人细胞中成功高效表达重组人血清白蛋白，分泌到培养液中的白蛋白达到750mg/L，纯度超过90％。该载体为首例用人血白蛋白启动子驱动人血白蛋白基因表达的载体，也是首例用于人细胞或哺乳动物细胞表达白蛋白的载体。该载体还克服了目的基因与筛选标记分用不同启动子的载体系统中在筛选时的高假阳性率和表达不均衡的问题。

本发明公开了芽孢杆菌表达载体及其构建方法和应用，该表达载体以pTC、pTN、pBE、pTK为出发载体将不同的启动子PlacI‑IPTG、Psrf、P43、PrepU与终止子T1T2组合分别插入上述载体中，构建四种表达载体。本发明以绿色荧光蛋白和β‑半乳糖苷酶作为报告基因明确该系列表达载体启动异源基因特征，四种表达载体均能在芽孢杆菌宿主中成功表达绿色荧光蛋白和β‑半乳糖苷酶基因，本发明构建的四种表达载体采用强启动子与强的转录终止子进行组合表达，可以在芽孢杆菌中稳定表达的转录出来的RNA，可以进行外源基因的高表达、特异性表达。