本发明公开一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组ORF5基因及其制备方法，重组ORF5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，本发明利用DNA shuffling技术，对不同遗传分支的PRRSV ORF5基因进行重组，获得重组的ORF5基因，再将重组ORF5基因连接原核表达载体进行原核蛋白表达，重组后的ORF5基因表达蛋白对大部分甚至所有亲本PRRSV均有免疫反应的中和抗体。
📄 2017108629301
📂 C12N15_40
👤 龙岩学院
📅 2017-09-22
本发明公开了一种稳定表达猪圆环病毒2型ORF3蛋白细胞株的构建及应用,属于生物技术检测领域。构建方法包括以下步骤:(1)在pLVZG‑CMV‑copGFP‑Puro载体的NheI和BamHI多克隆位点插入PCV2 ORF3基因;(2)用构建好的pLVZG‑CMV‑ORF3‑copGFP‑Puro重组质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞,培养、出毒、收取病毒上清、过滤得重组慢病毒液;(3)将包装好的重组慢病毒感染PK‑15细胞,通过嘌呤霉素筛选及鉴定,得稳定表达PCV2 ORF3蛋白细胞株。本发明利用重组慢病毒系统制备一种融合标签蛋白并能稳定表达PCV2 ORF3蛋白的细胞株,该细胞株为研究PCV2致病机理研究提供平台,有利于猪圆环病毒2型的深层次的致病机制研究。
📄 2021105649193
📂 C12N15_867
👤 龙岩学院
📅 2021-05-24
本发明公开了一种转氨酶突变体以及其编码基因，以及其在微生物催化2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸为底物不对称合成L‑草铵膦中的应用。所述转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID:1所示，其突变体是将SEQ ID:1所示的氨基酸序列的第138和141位中的一个进行单位点突变或组合突变获得的。本发明实现了高转化率转氨酶活力突变体基因的高效表达，酶活最高可达3827U/g。本发明转氨酶突变体在温度40℃，以pH 8.0缓冲液为反应介质进行生物催化反应获得L‑草铵膦，收率高达99％，产物e.e.值达到99％，具有较好应用前景。
📄 2021105603363
📂 C12N9_10
👤 浙江工业大学
📅 2021-05-21
本发明公开了一种重组细胞及其合成α,β‑不饱和醛的应用，所述重组细胞是将烯醇脱氢酶编码基因、NADPH氧化酶编码基因和血红蛋白编码基因共同导入宿主细胞构建而成。本发明融合共表达烯醇脱氢酶、NADPH氧化酶和血红蛋白的重组细胞一锅法级联催化200mM 2‑丁烯‑1‑醇的选择性氧化，反应6h后底物完全转化为产物2‑丁烯醛，显著地提高了基因工程菌的催化效率；所述方法具有高选择性，反应过程中没有检测到过度氧化产物饱和醛、烯酸和饱和酸，避免了副产物的生成；除了氧气，不需加入其它辅底物，也不需要加入过氧化氢酶；方法绿色高效，可适合大规模工业生产。
📄 2020101189158
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2020-02-26
本发明一种L‑半胱氨酸的基因工程菌及构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过(1)强化大肠杆菌L‑半胱氨酸合成途径的丝氨酸模块，增强大肠杆菌对丝氨酸的利用能力，(2)减弱丝氨酸的转运，减弱副产物对L‑半胱氨酸合成的影响，(3)增加硫模块合成基因的表达(4)质粒上异源表达Corynebacterium glutamicum的serC基因，得到L‑半胱氨酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，L‑半胱氨酸产量从2.7g/L提高到3.83g/L。
📄 2019114092389
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2019-12-31
本发明涉及一种无诱导剂添加高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明主要通过精细下调支链氨基酸代谢途径的关键基因ilvE、leuA，使工程菌在满足自身生长需求的同时解除支链氨基酸合成对D‑泛酸合成的抑制作用；敲除lacI基因使得工程菌在生产过程中不需要添加诱导剂IPTG，得到一株无诱导剂IPTG添加用于高产D‑泛酸的工程菌株，并对发酵培养基的组分、发酵工艺进行了优化，最终使得D‑泛酸摇瓶效价达到7.23 g/L；运用5‑L发酵罐发酵48~60小时，D‑泛酸产量能够达到90~105 g/L，发酵周期较出发菌株缩短35%~48%，发酵过程中无需添加诱导剂IPTG及其他氨基酸，减少了发酵步骤。
📄 2025103157262
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2025-03-18
本发明公开了一种用于重组表达棘白菌素B脱酰基酶的重组基因序列。本发明对实验室以获得的棘白菌素B脱酰基酶进行了克隆，并首次在大肠杆菌中成功的活性表达了重组棘白菌素B脱酰基酶。以往的多亚基单链结构蛋白在大肠杆菌中很难成熟，在我们的发明中采用将亚基拆分后共表达的方法，成功实现了在大肠杆菌中的活性表达。由于这是研究中首次将棘白菌素B脱酰基酶于大肠杆菌中表达，为其他的多亚基类似蛋白酶提供了一种新的异源表达思路，同时也为了后续的工业化生产奠定了一定基础。
📄 2021104362637
📂 C12N15_55
👤 浙江工业大学
📅 2021-04-22
本发明公开了一种产D‑泛酸的基因工程菌及应用，所述基因工程菌通过以下步骤构建获得：(1)以保藏号为CCTCC NO：M2018914的大肠杆菌为出发菌株，敲除aceF和mdh两个基因，获得菌株DPA02；(2)将来源于谷氨酸棒状杆菌的panB与panC基因，以及ppnk基因在菌株DPA02中过表达获得产D‑泛酸的基因工程菌。本发明产D‑泛酸的基因工程菌的D‑泛酸的产量在摇瓶发酵中提高至6.89g/L，提高了80％；同时，利用20％溶氧反馈补料结合甜菜碱添加的分批补料发酵策略使5L发酵罐中D‑泛酸积累量提高至68.3g/L，糖酸转化率达到0.36g/L。
📄 2021107275768
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2021-06-29
本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产L‑高丝氨酸的无质粒重组大肠杆菌及其应用。本发明提供的产L‑高丝氨酸的无质粒重组大肠杆菌，以Escherichia coli HS33为底盘细胞经代谢工程和基因编辑技术改造得到，相比于底盘菌株能够更好的利用葡萄糖等碳源物质进行L‑高丝氨酸的生产，在发酵生产L‑高丝氨酸的水平相比于出发底盘菌株从35.57g/L提高到75g/L。发酵成本低，产物浓度高，没有副产物影响，产物易于纯化，适用于工业应用。
📄 2023102089292
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2023-03-07
本发明公开了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的第214位和/或第499位经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的催化效率，进一步提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶产量。本发明构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.5倍，改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
📄 2021112636022
📂 C12N9_02
👤 浙江工业大学
📅 2021-10-28
本发明公开了一种十字花科植物腈水解酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225-285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，获得植物腈水解酶突变体，所述的植物腈水解酶突变体为下列之一或其中两种以上：(1)第223位的L突变为Q；(2)第263位的H突变为D；(3)第279位的Q突变为E。本发明提供的植物腈水解酶突变体的催化活力提高2.23倍，重组蛋白的可溶性大幅提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)-3-氰基-5-甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2018107650475
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2018-07-12
本发明公开了一种群体感应型大肠杆菌自裂解系统及其应用，所述大肠杆菌自裂解系统包括裂解蛋白编码基因、AHLs合成酶编码基因luxI、转录调节因子编码基因luxR及含LuxR‑AHLs复合物结合区域的luxI启动子PluxI序列；所述裂解蛋白编码基因由启动子PluxI调控。本发明中的细胞自裂解系统无需额外添加诱导剂，且无需人为监督，可以在大肠杆菌达到特定的生物量时启动裂解，从而释放胞内所表达的重组蛋白，对重组蛋白的损耗小，且可以持续性释放重组蛋白。本发明构建的不同强度的yasI启动子突变体调控裂解蛋白的表达，可以为不同重组蛋白的生产提供选择。
📄 2022112077723
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-30
柿子坊 · 知识产权运营
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