本发明公开了一种适用于ATAC‑seq测序的玉米胚乳提核方法。包括以下步骤:(1)从玉米种子中取出种皮,胚,收集胚乳,长期可保存于‑80℃中,胚乳取大约5g,在液氮中手动研磨成粉末;(2)将10mL体积的蔗糖缓冲液添加到每份粉末样品中,充分混匀,再通过100um孔筛过滤;(3)将步骤(2)的滤液再通过38um孔网,然后将产物700×g离心5分钟,收集上清液;(4)将上清液通过38um筛网过滤并2000×g离心5分钟,去除上清液,然后将沉淀重新悬浮在10mL蔗糖缓冲液中;(5)再次通过38um筛孔过滤,2000×g离心5‑10分钟,去除上清液,然后将沉淀重悬于5mL的重悬缓冲液;(6)再1000×g离心5分钟后,弃去上清液,将沉淀悬浮在5mL的含有蛋白酶抑制剂的pbs溶液中,取10‑20uL使用DAPI等体积染色10分钟,在荧光显微镜下观察。本发明制备得到的胚乳细胞核数量多、活性高,可以克服储藏组织淀粉含量高的影响,为后续单细胞测序、CUT&TAG、ATAC‑seq等相关研究提供有力的技术支持,提取效果也会对实验数据产生重要的影响。
📄 2024112450489
📂 C12Q1_6806
👤 安徽农业大学
📅 2024-09-06