本发明属于干扰素领域,涉及突变体干扰素的制备,特别是指一种猪干扰素α突变体YNS及其制备方法和应用。利用基因工程方法,将天然猪α干扰素基因进行改造,改造的氨基酸位点为H58→Y、E59→N及L61→S,将改造后的基因克隆到pET‑32a载体上构建重组质粒;然后分析猪α干扰素基因的密码子偏嗜性,将鉴定正确的重组质粒克隆到Rosetta表达菌中诱导表达和鉴定。重组蛋白以包涵体形式表达,经纯化和透析处理后,获得纯度较高的猪α干扰素。检测蛋白对Vero细胞的毒性和抗病毒活性,试验结果表明所得的YNS突变体蛋白的CC50为549.5ug/mL,其抗病毒活性为4.29×106U/mg。
📄 2019107792324
📂 C07K14_56
👤 安阳工学院
📅 2019-08-22
本发明公开了一种负载干扰素微胶囊的制备方法,步骤如下:A)将Na2CO3和Ca(NO3)2·4H2O分别配制成溶液;取Ca(NO3)2溶液加入α型干扰素;B)往溶液中Na2CO3溶液,超声后用离心法收集,洗涤干燥得到微胶囊模板;C)取微粒水洗三次,每次洗涤后离心去上清;将牛血清白蛋白加入到CaCO3模板中,形成牛血清白蛋白层;D)向步骤C)中CaCO3模板粒子表面的牛血清白蛋白层加入交联剂交联后离心去上清,水洗三次;E)将此核壳结构的胶体微粒用pH为7、0.02M的EDTA去核,彻底除去碳酸钙;F)往微胶囊中加入NaBH4溶液,室温下反应后离心去上清,水洗三次,得到负载干扰素的牛血清白蛋微胶囊。本发明根据细胞内外环境不同,设计构建出一种在细胞外保持稳定,在细胞内响应刺激作用下可以降解的微胶囊。
📄 2014105800357
📂 A61K9_50
👤 浙江理工大学
📅 2014-10-27