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本发明公开了一种具有抗肝癌和抑制肝纤维化功效的土鳖虫蛋白提取物，其制备方法为：取干燥土鳖虫打粉，加入乙醇中，回流提取，合并提取液，减压浓缩，离心，收集上清液，冷冻干燥，得土鳖虫乙醇提取物EE粉末；将土鳖虫乙醇提取物EE粉末溶解于Tris‑HCl缓冲液中，将硫酸铵添加到溶液中至饱和状态，搅拌，静置，离心，收集沉淀，复溶后透析以脱除盐分，冷冻干燥可得土鳖虫粗蛋白样品EEP。本发明通过大量实验筛选，对土鳖虫蛋白成分系统深入研究，分离出了活性蛋白部位EEPC及活性蛋白成分PC3‑III，活性蛋白部位EEPC及活性蛋白成分PC3‑III通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移来共同发挥抗肝癌药效，并且能通过抑制活化的HSC细胞增殖来延缓肝纤维化的进程。