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本发明涉及一种黔产道地金钗石斛花HPLC指纹图谱的构建方法，包括供试品溶液的制备，色谱条件的选择，并用高效液相色谱仪进行检测，得到黔产金钗石斛花的指纹图谱。其中色谱条件为：色谱柱为AgilentSB‑C18(250×4.6mm，5μm)，以乙腈‑0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为254nm，流速为0.8m L/min，柱温：30℃，进样量10μL，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对样品指纹图谱进行分析，确定26个共有峰,并指认了其中D‑无水葡萄糖成分，得到黔产金钗石斛花HPLC指纹图谱。所建立的黔产金钗石斛花HPLC指纹图谱特征性强、稳定性高、整体性好，能广泛应用于黔产金钗石斛花的质量控制和真伪鉴别。