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本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及骨髓间充质干细胞培养基组合及培养方法。本发明所述骨髓间充质干细胞培养基组合，包括培养基I和培养基II；所述培养基I为添加紫菀酮、褪黑素、亚油酸、L‑谷氨酰胺、bFGF、胰岛素、黄芪多糖的DMEM/F12培养基；所述培养基II为添加ACE2、亚油酸、L‑谷氨酰胺、bFGF、胰岛素、黄芪多糖的DMEM/F12培养基。本发明提供一种骨髓间充质干细胞的培养方法，对骨髓间充质干细胞所用培养基进行改进，针对细胞培养过程的不同，针对性地设计了原代培养基和传代培养基，两者相互配合，培养得到的骨髓间充质干细胞生长状态良好，具有更好的增殖能力和成骨分化潜能。