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本发明属于生物工程领域，具体涉及具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用。本发明的DNA聚合酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:2所示和SEQ ID NO:3所示；编码所述DNA聚合酶的核苷酸序列包括如SEQ ID NO:1所示。同时，本发明提供一种包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的重组载体及其编码的DNA聚合酶、重组载体的制备方法和应用方法。本发明提供的DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用，可在血清或土壤等样本中进行直接的聚合酶链式反应时，对样本溶液中抑制物的耐受性大幅度提高，可在样本溶液中直接有效地完成聚合酶链式反应，检测目标基因序列。