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本发明公开了药用真菌赤芝中两种具有保肝活性的三萜化合物的制备方法和应用，所述两种三萜化合物即化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的结构式分别如I和Ⅱ所示：所述两种三萜化合物的制备方法是以赤芝的子实体为原料，用化学溶剂提取、萃取，经过正相柱色谱初步分离，MCI色谱脱色，再用正相柱色谱分离，然后用半制备HPLC分离获得。所述应用为上述两种三萜化合物在制备肝脏保护药物中的用途。本发明首次从赤芝中分离得到三萜甲基灵芝酸C和3β,7β‑二羟基‑11,15,23‑三羰基‑羊毛甾烷‑8,16‑二烯‑26‑羧酸，本制备方法简单，纯化度高；另外，本发明首次发现上述三萜化合物具有较好的保肝活性，为此类三萜化合物类物质的提取以及药用研究提供了基础及新思路。