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本发明涉及病原菌检测生物技术领域，公开了一种一管法同时检测两种向日葵茎部病害的检测试剂盒及使用方法，包括RPA扩增体系、CRISPR/Cas检测体系和侧向流试纸条；RPA扩增体系包括LI‑F/LI‑R引物对和DH‑F/DH‑R引物对，LI‑F/LI‑R引物对包括Seq ID No.1和Seq ID No.2；DH‑F/DH‑R引物对包括Seq ID No.3和Seq ID No.4；CRISPR/Cas检测体系包括CRISPR/Cas12a和CRISPR/Cas13a。本方案通过优化设计两对引物，即LI‑F/LI‑R引物对和DH‑F/DH‑R引物对，其中LI‑F/LI‑R引物扩增向日葵黑茎病菌的基因组DNA；而通过在DH‑F/DH‑R引物对中添加“GGG”的启动子序列，使得该引物扩增向日葵茎溃疡病菌基因组DNA的扩增产物为RNA；便于在同时扩增时分别形成向日葵黑茎病菌基因组核酸的DNA产物和向日葵茎溃疡病菌基因组核酸的RNA产物，从而可以采用两种检测方式同时对两种目标病原物进行检测，避免相互干扰。

本发明涉及一种油菜黑腿病致病菌的快速检测试剂盒及其使用方法，包括油菜茎基溃疡病菌和油菜黑胫病菌的快速检测试方法和试剂盒，致病菌的检测方法包括靶标核酸分子的特异性扩增和基于特异性向导RNA、Cas12a和核酸探针的特异性检测。使用本发明的方法可快速检测油菜植物组织中是否含有油菜茎基溃疡病菌和油菜黑胫病菌。通过与核酸等温扩增技术结合，该检测方法的灵敏度可以提到大幅提高，并且可在田间、检疫现场使用。油菜黑腿病致病菌的快速检测试剂盒用于检测油菜茎基溃疡病菌或油菜黑茎病菌；具有灵敏度高、特异性好、耗时短、不依赖大型实验设备等优势，方便用于田间病害调查和基层实验室对油菜黑腿病病原菌的快速检测和鉴定诊断。