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本发明提供了一种绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建及其应用。采用同源重组的方法将eGFP和Flag标签插入到主要衣壳蛋白编码基因的C端，进而通过细胞分选仪和极限稀释法筛选出绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒。针对目标病毒，通过Western Blot来验证eGFP和Flag标签是否插入预设的位置，并进一步通过病毒基因组测序确定eGFP和Flag插入的确切位置。最后利用透射电镜和原子力显微镜观察绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒和野生型的结构差异，结果显示二者结构大小基本一致，无明显差异。该重组病毒作为一种可研究病毒与宿主相互作用的分子工具，在免疫学研究中具有重要的价值，为进一步研究鱼类抗病毒免疫提供了新的工具。

本发明提供一种T7噬菌体高滴度培养方法及其应用。本发明利用基因工程操作方法构建表达gene17.5串联gene19.5编码蛋白的重组大肠杆菌作为补偿宿主，再通过反向遗传方法在补偿宿主中拯救出gene17.5、gene19.5双基因缺失株噬菌体，双基因缺失T7噬菌体感染补偿宿主后在宿主内复制、富集，并在诱导gene17.5、19.5编码蛋白表达后裂解宿主。通过推迟宿主的裂解时间，增加噬菌体在宿主内的复制循环次数达到高滴度培养目的。

本发明提供了一种靶向wnt信号通路溶瘤腺病毒的构建方法，包括将启动子插入pXC2‑Δ24中并连接到质粒中，酶切；将TSLC1基因与质粒连接，将连接产物与DH5α感受态细胞混合，酶切；将上述两个步骤得到的终产物连接，转化到含有全序列腺病毒骨架的质粒大肠杆菌中重组，产生E1A区由启动子控制代替E1A内源启动子的以及缺失E1A‑CR2区的24碱基的腺病毒骨架DNA质粒；腺病毒骨架DNA质粒用pacⅠ酶切线性转化后，转染到293A细胞中病毒包装，病变后，得到溶瘤腺病毒Ad.wnt‑E1A(Δ24)‑TSLC1。采用本发明的构建方法得到的溶瘤腺病毒对结肠癌细胞和肝癌细胞具有明显的杀伤效果。

本发明公开了一种靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建方法，包括如下步骤：1）、制备携带GP73核心启动子的pXC2?GP73质粒；2）、制备pSD55?GP73?gene质粒；3）、将pSD55?GP73?gene质粒用PmeI线性化后转化到含有全序列腺病毒骨架DNA的质粒Adeasy?1大肠杆菌BJ5183中重组，产生E1A区由GP73核心启动子控制的以及缺失E1B55和E3区携带目的基因的腺病毒骨架DNA质粒载体；4）、将重组鉴定正确的质粒用Pac I酶切线性化后，转染到293A细胞中进行病毒包装，待细胞出现病变后，得到目的溶瘤腺病毒GD55?gene。本发明还同时提供了上述溶瘤腺病毒GD55?gene在制备治疗肝癌药物中的应用。