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本发明涉及生物技术领域，尤其涉及牛全血中性粒细胞的分离试剂盒和分离方法。该试剂盒包括试剂A和试剂B；所述试剂A由9wt%聚蔗糖水溶液和34wt%泛影酸钠水溶液按照体积比为56∶23的比例混合制得；所述试剂B由等体积的试剂A和试剂B’制得；所述试剂B’9wt%聚蔗糖水溶液和34wt%泛影酸钠水溶液按照体积比为22∶23比例的混合制得。进一步地，该试剂盒还包括试剂C和试剂D。本发明提供的试剂盒从根本上解决了现有细胞分离技术中存在的造价高、细胞活性低、分离效率低的问题。同时，相比同类试剂盒，本发明简化了分离过程，解决了试验分离成功率低的问题。

本发明公开了过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途。本发明发现，过氧麦角甾醇孵育可以有效提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，且该杀伤力随着过氧麦角甾醇孵育浓度的提高而增强。因此，可以将过氧麦角甾醇用于NK细胞体外培养，获得杀伤力更强的NK细胞，为过继性NK细胞治疗创造更好的疗效。

本发明提供了NK细胞在制备治疗免疫相关病症的药物中的用途，属于细胞生物学技术领域。本发明所提供的NK细胞为使用地衣多糖和天蚕素A联合培养后获得的NK细胞。实验检测结果发现，本发明所提供的NK细胞具有高杀伤活性和高增殖能力，对于肺癌细胞具有显著的杀伤能力。因此，本发明为NK细胞的免疫治疗提供了更优异的细胞源，后续可以将地衣多糖和天蚕素A联合培养处理的NK细胞制备成免疫药物，用于有效治疗肿瘤等免疫相关疾病，提高NK细胞的免疫治疗效果。

本发明提供了一种DC细胞的制备方法，尤其适用于高纯度、高功能活性DC细胞的快速获得。该方法包括从外周血单核细胞(PBMC)分离、诱导培养、成熟处理等步骤，通过引入抗CD47单域抗体或LPS促进树突状细胞的成熟，显著提高其免疫活性。本发明还进一步将该方法应用于制备抗肿瘤细胞制剂，能够显著增强负载肿瘤抗原的DC细胞激活肿瘤特异性T细胞的能力，并提升T细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。本发明的制备方法克服了现有技术中的缺点，具有高效、安全、稳定的优点，能够为肿瘤免疫治疗提供更加可靠的细胞治疗方案。

本发明提供了一种NK细胞的分离、培养、激活及其在肿瘤免疫中的应用方法。该方法包括从健康成人外周血中分离单核细胞，并通过负选择法去除非NK细胞群体，富集纯化NK细胞。通过特定的细胞因子的刺激，成功扩增NK细胞并激活其细胞毒性。本发明通过优化NK细胞的制备与激活方法，在体外获得了具有高效杀伤活性的NK细胞，并通过与免疫检查点抑制剂联合使用，显著提高了肿瘤治疗效果。结合NK细胞的免疫记忆效应，本发明提供了一种新的抗肿瘤免疫治疗方法，并可应用于制备新的抗肿瘤药物，为肿瘤治疗提供了创新的思路。

本公开涉及一种TIL细胞体外扩增培养基组合，包括诱导培养基、增殖培养基和活化适应培养基；所述诱导培养基的组成成分包括：基础培养基、灭活动物血清、香菇多糖、黄芪多糖、党参多糖和枸杞多糖；所述增殖培养基的组成成分包括：基础培养基、灭活动物血清、白细胞介素和单克隆抗体；所述活化适应培养基包括：基础培养基、胰岛素、转铁蛋白和谷氨酰胺。通过上述技术方案，利用本公开所提供的TIL细胞体外扩增培养基组合和方法培养获得的TIL细胞数量更多，在临床治疗中也具有更高的靶细胞杀伤活性。

本发明属于细胞培养领域，更具体地，涉及一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法。利用本发明提供的方法经过7‑8天的培养可获得足量的BMDC细胞，本发明通过采用特定的培养条件，阶梯式改变CO2的浓度，提高树突状细胞的培养数量。本发明还对所得的BMDC细胞进行了光镜下观察、流式细胞仪检测CD11c阳性率以及扫描电镜的观察以及方法优化。利用本发明的方法每只小鼠可以在6‑8天内诱导培养2‑3×107及以上的树突状细胞。形态上变现为存在有细胞伪足。经流式细胞仪检测发现CD11c+阳性率达94.9%以上，满足常规实验需求。扫描电镜下也可观察到细胞立体结构特别是微绒毛。