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本发明提供一种伊枯草菌素A抗菌脂肽及其制备方法，方法包括采用以豆粕为基质，通过优化固态培养基发酵产生抗菌脂肽，采用水提及酸沉淀、两步超滤法纯化，得到高纯度组分。通过优化豆粕固体发酵的培养基及发酵条件，使优化后的发酵培养基产的抗菌脂肽含量达到782.36 mg/kg，为优化前纯豆粕固体发酵的3.2倍，抗菌脂肽对恶臭假单胞菌的抑菌率能够从优化前的64.21%提高到90.01%。本发明的发酵底物成本低廉，固态发酵设备简单，单位发酵基质浓度高，生产能耗低，同时两步超滤法降低了纯化成本。得到的高纯度脂肽为未曾报道过新的伊枯草菌素A，能够有效抑制恶臭假单胞菌，在水产养殖业及人类临床等的疾病防治方面具有广阔的应用前景。