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本发明属于精细化工技术领域，具体涉及双氰基二苯代乙烯型双光子荧光溶剂生色水溶性探针及其合成方法和应用，所述探针以双氰基二苯代乙烯(DCS)为双光子荧光母体制备。该探针分子体积小，在水溶解度良好且适于溶剂极性的检测，另外该探针的荧光强度、双光子吸收截面随粘度的增加而发生明显变化，显示了很宽的溶剂生色范围、大的双光子吸收截面和超大斯托克斯位移，大大提高了检测灵敏度、成像清晰度、灵敏度与横纵向分辨率，以及检测的准确度；细胞显微成像实验表明其在细胞或组织中具有良好的生色范围和吸收效果，可以很好的检测和反映出细胞粘度的变化情况，且本身对细胞没有毒副作用。在生物、医药领域中具有极大的应用价值。