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本发明公开了一种检测过氧亚硝酸盐的比率荧光探针及其制备方法与使用方法。本发明利用(E)‑2‑(3‑(4‑氨基苯乙烯基)‑5，5‑二甲基环己基‑2‑烯‑1‑亚基丙二腈构筑经典的分子内电荷转移体系。本发明当存在过氧亚硝酸盐的条件下，过氧亚硝酸盐与探针分子上的酰胺部分发生氧化反应而断裂生成了强电子供体‑氨基，进而增强了分子的ICT效应，使发射波长发生红移，从而探针分子发射出较强的红色荧光。本发明提供的二氰基异佛尔酮类染料的“比率”型过氧亚硝酸盐探针对过氧亚硝酸盐溶液具有良好的响应性能，能够实现对样品内微量过氧亚硝酸盐的灵敏、快速、定量检测，具有操作简便，成本低廉，水溶性好，响应灵敏。