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本发明属于生物传感器技术领域，具体涉及一种基于交替光激发调控亚甲基蓝电子传递的比率传感器的构建方法及其应用；以AFB1适配体为主链，与MB‑DNA1和MB‑DNA2进行互补配对，利用PCR技术合成含有三条链的复合物，记为MB‑Mix‑DNA；在预处理后的ITO电极上修饰金纳米粒子溶液后，将MB‑Mix‑DNA修饰在电极表面，孵育后即得到电化学传感器；设定λ1和λ2，在可见光激发下，两个的电化学信号，分别记为I1和I 2；根据获得的两个电流值的比值和AFB1浓度的对数关系构建标准曲线，实现对AFB1的高选择和准确性检测，检测范围为0.0005～50ng/mL，检测限为0.175pg/mL。