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本发明涉及一种新型四氧化三铁荧光纳米探针的制备方法及应用，属于生物探针领域。本发明以具有生物相容性的四氧化三铁纳米颗粒(Fe3O4)为载体，表面修饰PEG后，与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的基质金属蛋白酶‑2(MMP‑2)特异性识别的多肽底物偶联，制备得到一种新型MMP‑2特异性响应纳米分子探针Fe3O4‑PEG‑KCPLGVR‑FITC，该探针生物相容性好，稳定性高，特异性高，检测灵敏度高，荧光信号强，可应用于MMP‑2过表达肿瘤细胞的早期准确、快速诊断。

本发明公开了一种线粒体靶向的双信号turn-on的甲醛荧光纳米探针中间体(III)的制备方法及应用，方法为以对羟基苯甲醛为起始原料，在缚酸剂的存在下，于温度为60-70℃下进行活化，然后以3-溴丙炔为亲核试剂，温度60-70℃下，在丙酮溶剂中发生亲核取代反应，得到化合物(II)；化合物(II)利用氨甲醇溶液在0℃下进行氨化，在0℃下加入丙烯基硼酸邻二叔醇酯，混合后温度控制在25-35℃下进行反应，得到所述式(III)所示的化合物。式(III)所示的化合物可作为制备双信号turn-on的甲醛荧光纳米探针中间体。该纳米探针在水中几乎没有荧光，与甲醛反应后得到两个自由的荧光物质，从而实现双turn-on的效果，从而提高了检测结果的准确性。

本发明公开了一种线粒体靶向的双信号turn‑on的甲醛荧光纳米探针的制备方法及应用，是一种基于荧光能量共振转移以及自组装共同作用下的甲醛荧光纳米探针。该纳米探针在水中几乎没有荧光，与甲醛反应后得到两个自由的荧光物质，从而实现双turn‑on的效果，从而提高了检测结果的准确性。纳米探针对甲醛具有很好的专一性。共聚焦荧光显微镜成像实验很好地证明了纳米探针能够渗透细胞膜进入细胞的线粒体中，且能够在细胞中检测甲醛浓度的变化，为研究甲醛在细胞线粒体的代谢机制提供了新的工具，在生物领域具有很好的前景。

本发明公开了一种线粒体靶向的双信号turn-on的甲醛荧光纳米探针中间体(V)的制备方法及应用，方法为：以对羟基苯甲醛为起始原料，在缚酸剂的存在下，温度为60-70℃下进行活化，再以3-溴丙炔为亲核试剂，在丙酮溶剂中发生亲核取代反应，得到化合物(II)；化合物(II)利用氨甲醇溶液在0℃下进行氨化，加入丙烯基硼酸邻二叔醇酯，混合后温度控制在25-35℃下进行反应，得到化合物(III)，3-甲酰基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺和化合物(III)，在路易斯酸、还原剂作用下，先发生席夫碱反应，再发生还原反应，得化合物(V)。化合物(V)可作为制备双信号turn-on的甲醛荧光纳米探针中间体。该纳米探针与甲醛反应后得到两个自由的荧光物质，从而实现双turn-on的效果，提高了检测准确性。

本发明公开了可视化检测次氯酸根的比率荧光纳米探针及其制备与应用，该荧光纳米探针是以根据现有技术制备的聚环氧乙烷-共-聚苯乙烯、4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯乙酮和5-硝基水杨醛为原料制备的一种新型比率荧光纳米探针。该荧光纳米探针能在纯水溶液中实现对次氯酸根的高选择性和高灵敏度快速比率检测。相比于现有的荧光检测技术，本发明得到的荧光纳米探针具有对次氯酸根的高选择性比率快速响应和可视化检测，可有效避免聚集诱导荧光猝灭现象，优良的生物相容性和水分散性，且投入成本较低，合成路线简单等优点，适于放大合成和实际生产应用，在分析化学、生命科学、以及环境科学等技术领域有着巨大的应用前景。