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一种基于纳米光纤探针的单细胞检测仪，包括有纳米探针、光源单元、微操系统、电学检测单元、细胞定位系统和光子探测单元，纳米探针最内层为光纤层，在光纤层外壁包裹有纳米环电极层，在纳米环电极层外壁包裹有绝缘层。基于纳米光纤探针的单细胞检测仪的探针制作方法，包括有拉制、溅射、绝缘层制作和聚焦离子束切割四个步骤。本发明具有高灵敏度，可以实现单细胞级别的检测，相比于传统的需要粉碎数以百万计的细胞的检测手段，需要的细胞样品量大大减少，提高了早期疾病检测的成功率。它可以进行活体细胞的检测，避免了细胞处理过程中假象的产生。极大的提高了时空分辨率和可检测的靶标物范围，实时检测分析单细胞内的生物化学机制。