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本发明涉及一种确定果实膨大期树体叶片氮含量的方法，包括：对叶片样本进行光谱采样，得到四组敏感波段光谱值；获取叶片样本的氮含量；根据第一组和第二组的敏感波段光谱值计算第一差值植被指数；根据第三组和第四组的敏感波段光谱值计算第二差值植被指数，根据第一差值植被指数和第二差值植被指数计算初始四波段高光谱指数；根据初始四波段高光谱指数和氮含量绘制初始回归曲线；根据初始回归曲线确定最优四波段高光谱指数；根据最优四波段高光谱指数和氮含量建立最优监测模型；根据最优监测模型计算检测样本中的叶片氮含量。本发明使用波段数少，计算方法简便，能够提高确定果实膨大期树体叶片氮含量的精确性、简便性和高效性。