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本发明属于碱性磷酸酶检测技术领域，公开了一种利用反蛋白石水凝胶薄膜检测碱性磷酸酶的方法，以夹心层的方法将充分混合的聚甲基丙烯酸羟乙酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯及2‑羟基‑2‑甲基苯丙醇渗入光子晶体结构缝隙，紫外聚合反应后除去光子晶体模板，则得到具有有序大孔结构的薄膜；再利用该反蛋白石水凝胶薄膜检测碱性磷酸酶的方法，将对硝基苯磷酸二钠在40～70℃预热10min，并加入激活剂与碱性磷酸酶溶液，混合反应后，得到含有p‑NP分子的反应液；将反蛋白石水凝胶薄膜置入反应液中，反应后反蛋白石水凝胶薄膜颜色发生变化。解决以前比色法中的颜色对比度不强烈，不稳定等问题，具有简单携带和即时检测的特性，使其在家庭诊断等领域具有很高的应用价值。