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本发明公开了一种双光子荧光探针及其合成方法与应用，本发明公开的双光子荧光探针以丙烯酸酯上的α,β‑不饱和键及游离的醛基作为反应位点，当向体系中加入GSH后，丙烯酸酯上双键与巯基发生加成反应，醛基与氨基形成动态亚胺键，从而生成一个新的十六圆环作为荧光信号的报告基团，从而高效监测GSH的存在。本发明通过紫外‑可见吸收光谱法、荧光光谱法等研究了双光子荧光探针对多种氨基酸的识别效果，结果表明本发明荧光探针在PBS缓冲溶液中能够高效选择性识别GSH，且对GSH具有很高的响应灵敏度，及在HeLa细胞、小鼠大脑组织切片和植物组织切片中也可以实现GSH的可视化检测。

本发明涉及精细化工领域中一类细胞内汞离子检测与显像用二苯乙烯基双氰基苯双光子荧光探针，该探针通过2,5-二(4-[二(2-氯乙基)氨基]苯乙烯基)对苯二甲腈与巯基乙醇发生亲核取代反应而制备。810nm的激光激发可避免细胞的光致毒。在pH 4.5—13的范围内，探针对汞离子有很好的选择性，而钠、钾、钙、镁、锰等金属离子对检测没有干扰，可以检测微摩尔浓度的汞离子。探针分子络合汞离子后荧光强度下降，可以对汞离子含量进行双光子荧光检测。双光子荧光显微成像实验表明这类探针对成纤维细胞等细胞或组织渗透性好，本身对细胞没有毒副作(56)对比文件Chibao Huang 等.A highly selectiveand sensitive two-photon chemosensor forsilver ion derived from 3,9-dithia-6-azaundecane《.Sensors and Actuators B》.2008,第113-117页.Seon Young Gwon 等.Novelstyrylbenzothiazolium dye-based sensorfor mercury,cyanide and hydroxide ions.《Spectrochimica Acta Part A：Molecular andbiomolecular spectroscopy》.2015,第144卷第226-234页.