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本发明公开了一种基于罗伦隐球酵母与拮抗芽孢杆菌混合施用的水晶梨生物保鲜剂及其制备方法和用途，12株拮抗芽孢杆菌分别与罗伦隐球酵母混合施用，均可提高水晶梨采后的生防效果，效果最好的菌株4株，最终确定了混合施用效果最佳的拮抗芽孢杆菌与罗伦隐球酵母的施用浓度与配比，每1 ml防治剂中有106~109个拮抗芽孢杆菌和106~109个罗伦隐球酵母，并保证其菌数配比为1：1时可以达到最佳防效，本发明的生物保鲜剂罗伦隐球酵母与拮抗芽孢杆菌都具有安全高效的特点，且具有环境友好、生防效果突出等优点。本发明的混菌保鲜剂，能进一步减少化学杀菌剂的施用，对于食品安全、环境保护、农业增收增效以及社会的可持续发展等都具有重要的意义。