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本发明公开了一种固定化酶、基于可重复利用该酶的生物制油方法及装置，所述固定化酶是以聚乙二醇修饰的Fe3O4纳米颗粒为基体，基体先吸附负载第一部分游离蛋白酶，然后将其与第二部分游离蛋白酶一起分散在海藻酸钠水溶液中混合均匀，依次经过Ca2+离子硬化和戊二醛交联反应的两步作用过程，使外层的海藻酸钠反应形成网状大孔径的凝胶微球，最后经洗涤、干燥，制备得到包埋第二部分游离蛋白酶及聚乙二醇修饰纳米Fe3O4负载固定化蛋白酶的微球复合物。本发明固定化酶在非均相浆渣混合体系中的稳定性、原位分离方便性大大提高，固定化酶能够更好地重复使用，另外对生物制油反应器的搅拌桨叶进行改进，能进一步提升固定化酶使用的稳定性。