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本发明涉及荧光定量PCR检测方法技术领域，为解决目前尚无对中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因进行实时荧光定量PCR检测方法的问题，本发明提供了一种中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因的实时荧光定量PCR检测方法及所用引物。所述方法包括：1)中华乌塘鳢目的基因Cu/Zn‑SOD的实时荧光定量引物设计；2)中华乌塘鳢内参基因β‑Actin的实时荧光定量引物设计；3)中华乌塘鳢不同组织cDNA逆转录；4)中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因的实时荧光定量PCR检测。本发明能够实现对中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因进行实时荧光定量PCR检测；方法简洁，准确度高，可信度高；能够实现对中华乌塘鳢不同组织进行检测。

本实用新型涉及一种荧光定量PCR检测用试剂盒，属于试剂盒技术领域，包括试剂盒体、第一试剂副盒以及第二试剂副盒，第一试剂副盒、第二试剂副盒均活动安置在试剂盒体内，第一试剂副盒、第二试剂副盒间设有试剂隔板，试剂盒体内部顶端侧壁上设有滑槽，第一试剂副盒顶部侧边设有滑动插接在滑槽内的滑块边条，第一试剂副盒底部两侧安装设有轨槽，第二试剂副盒顶部两侧安装设有与轨槽适配滑动卡接的滑轨；本实用新型有效的解决了现有荧光定量PCR检测用试剂盒空间占比大、拿取不便等问题，不仅有效的缩小的空间占比，还可以将副盒充分展开，方便荧光定量PCR检测试剂瓶在检测过程中的大量存放和整理工作，具有显著的实用性。

本发明公开了一种海氏肠球菌的PCR扩增引物及探针引物，包括：海氏肠球菌引物正向序列：5'‑CCACTCAGCTTGATGTAA‑3'；反向序列：5'‑GTTTGTTCAATAATCTTCAGATC‑3'；探针序列：5'‑6‑FAM‑ACAACAGCACCACGACGAT‑TAMRA‑3'；一种医用食品中海氏肠球菌的微滴数字PCR检测方法，包括以下步骤：称取25 g样品至盛有225 mL无菌水的均质袋中，充分混匀后10倍梯度稀释，得到待测样品；提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；获得鉴定海氏肠球菌的PCR扩增引物及探针；将所得DNA进行微滴数字PCR扩增，获得反应液后进行检测与分析。结果表明该引物对海氏肠球菌的扩增具有特异性；同时微滴数字PCR对其扩增稳定，具有重复性；取浓度为102‑107copies/µL的质粒标准品、102‑107 CFU/mL的菌液纯培养物及含有海氏肠球菌浓度为103‑107 CFU/g的模拟污染样品进行检测，灵敏度较好。

本发明提供了一种用于检测樟疫霉菌（Phytophthora cinnamomi）的引物及巢式PCR检测方法，所述引物组包括2对引物，第1对为疫霉菌Ypt1基因通用引物ph1F/Yph2R，第2对为鉴定樟疫霉菌的特异性引物PCINF/PCINR。本发明只要有10fg/μL病原菌微量DNA存在，即可准确检测出，本发明所提供的樟疫霉菌巢式PCR检测方法具准确性高、特异性强、灵敏度高、检测过程操作简便快速等优点，可用于樟疫霉菌引起病害的早期诊断和病菌的监测和鉴定，克服了传统检测和鉴定方法步骤繁琐、周期长等问题。

本发明公开了一种芋疫霉菌（Phytophthora colocasiae）巢式PCR检测方法，以样品DNA为模板，疫霉菌Ypt1基因通用引物ph1F /Yph2R进行巢式PCR第1轮扩增，再以巢式PCR第1轮扩增产物为模板，通过设计的一对鉴别芋疫霉菌的特异性引物PCOF/PCOR进行巢式PCR第2轮特异性扩增；第2轮扩增产物经凝胶电泳检测，如果存在327bp的DNA特异性条带，即为检测出芋疫霉菌，否则未检出。本发明所提供的芋疫霉菌巢式PCR检测方法具准确性高、特异性强、灵敏度高、检测过程操作简便快速等优点，可用于田间芋头疫病的早期诊断和病菌的监测和鉴定，克服了传统检测和鉴定方法步骤繁琐、周期长等问题。