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本发明涉及荧光定量PCR检测方法技术领域，为解决目前尚无对中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因进行实时荧光定量PCR检测方法的问题，本发明提供了一种中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因的实时荧光定量PCR检测方法及所用引物。所述方法包括：1)中华乌塘鳢目的基因Cu/Zn‑SOD的实时荧光定量引物设计；2)中华乌塘鳢内参基因β‑Actin的实时荧光定量引物设计；3)中华乌塘鳢不同组织cDNA逆转录；4)中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因的实时荧光定量PCR检测。本发明能够实现对中华乌塘鳢Cu/Zn‑SOD基因进行实时荧光定量PCR检测；方法简洁，准确度高，可信度高；能够实现对中华乌塘鳢不同组织进行检测。

本发明公开了一种海氏肠球菌的PCR扩增引物及探针引物，包括：海氏肠球菌引物正向序列：5'‑CCACTCAGCTTGATGTAA‑3'；反向序列：5'‑GTTTGTTCAATAATCTTCAGATC‑3'；探针序列：5'‑6‑FAM‑ACAACAGCACCACGACGAT‑TAMRA‑3'；一种医用食品中海氏肠球菌的微滴数字PCR检测方法，包括以下步骤：称取25 g样品至盛有225 mL无菌水的均质袋中，充分混匀后10倍梯度稀释，得到待测样品；提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；获得鉴定海氏肠球菌的PCR扩增引物及探针；将所得DNA进行微滴数字PCR扩增，获得反应液后进行检测与分析。结果表明该引物对海氏肠球菌的扩增具有特异性；同时微滴数字PCR对其扩增稳定，具有重复性；取浓度为102‑107copies/µL的质粒标准品、102‑107 CFU/mL的菌液纯培养物及含有海氏肠球菌浓度为103‑107 CFU/g的模拟污染样品进行检测，灵敏度较好。