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本发明公开了一种鸡粪复合发酵菌剂的制备方法及用其制备的发酵菌剂、鸡粪生物有机肥及其制备方法与应用，涉及微生物应用技术领域。菌剂的制备方法，包括：S1：将芽孢杆菌Bacillus.spHZ3、嗜热脂肪地芽孢杆菌、台湾假黄单胞菌等六株菌分别进行发酵，获得六株菌的新鲜发酵菌液；S2：六株菌新鲜发酵菌液按照3‑5：1‑3：1‑2：2‑3：2‑5：1‑3的体积比混合，获得复合菌剂；S3：再添加菌群促进剂，即得。生物有机肥的制备方法，包括(1)向鸡粪中添加氧化剂、激活剂预处理，(2)添加菌剂使之发酵，(3)干燥、粉碎，即得。有益效果：本发明将氧化处理技术与微生物发酵处理耦合，缩短了堆肥的时间，提高了有机质的转化，增强了有机肥肥效，达到快速制备有机肥的效果。