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本发明公开一种双酶型免疫荧光系统检测痕量黄曲霉毒素B1的方法，属于黄曲霉素检测技术领域。本发明利用MNPs‑PEG‑Apt对AFB1的特异性识别，通过AFB1‑COD和AFB1进行竞争，上清液中剩余的AFB1‑COD可以氧化胆碱生成H2O2，加入底物ADHP后，HRP催化ADHP‑H2O2反应，ADHP被氧化后呈现红色的荧光，我们以此来对AFB1进行定量检测。该AFB1的检测方法的线性范围是1.5‑15ng/mL，检测限是1.32ng/mL。与传统的方法相比，本实验对样品的前处理步骤较简单，所需要的仪器设备也很简单，研究方法快速便捷且易于操作和观察，具有更高的灵敏度。得到了比较好的结果反馈。