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本发明公开了一种HRP印迹水凝胶的制备方法，采用丙烯酰胺（AAm）为功能单体，甲叉双丙烯酰胺(MBAA)为交联剂，过硫酸铵（APS）为催化剂，四甲基乙二胺(TEMED)为引发剂，辣根过氧化物酶（HRP）为模板分子，按照一定配比原位聚合制成厚度为1mm的HRP印迹水凝胶，洗去模板分子，样品溶液直接滴加到凝胶表面，经吸附，洗去未键合分子，采用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)-H2O2体系显色，所产生的颜色可直接肉眼检测。本发明的制备方法简单，成本低，制备的HRP印迹水凝胶检测方便，可多次重复使用，可高选择性地识别血清样品中HRP，有效地去除基质干扰，具有很大的应用价值和市场前景。