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本发明公开了一种可显著提高NK细胞体外扩增效率及抗肿瘤活性的培养基，所述培养基包含：(1)基础培养基：含10％人AB血清、1％GlutaMAX、0.1％β‑巯基乙醇的RPMI 1640培养基；(2)融合多肽：终浓度150ng/mL，通过将IL‑15突变体与NKG2D配体ULBP2连接，实现IL‑15R和NKG2D双通路协同激活；(3)抗PD‑1抗体：终浓度30μg/mL，阻断PD‑1/PD‑L1抑制信号。实验表明，本培养基培养7天可使NK细胞扩增倍数达39.8倍，CD69活化比例提升至83.6％，凋亡率降低至6.5％。体外对PD‑L1+肿瘤细胞的杀伤率提升至64.7％，荷瘤小鼠模型中肿瘤体积抑制率达66.4％，中位生存期延长至>60天。本发明通过多通路协同作用突破现有NK细胞扩增与活性限制，为实体瘤免疫治疗提供高效解决方案。