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本发明涉及一种醛缩酶基因salA及其在构建高产ADD基因工程菌中的应用，以及高产ADD的分枝杆菌基因工程菌及其构建与其在微生物发酵制备1,4‑雄二烯‑3,17‑二酮中的应用。所述高产ADD的分枝杆菌基因工程菌是以分枝杆菌为底盘菌，依次敲除kshA1、MnOpccR、salA基因获得。本发明所提供的基因工程菌株有效地控制了副产物的生成，大大提高甾体底物的利用率和产物的摩尔转化率，简化了后处理的过程，该策略还可以应用在同类型的新金色分枝杆菌进行植物甾醇为底物，微生物转化侧链降解合成AD和9‑OH‑AD等共性合成路径的产物合成，完全阻断4‑HBC，1，4‑HBC副产物合成，在提升底物植物甾醇的利用率的同时抑制副产物累积减少下游分离的负担，具有一定的普适性，适合于大力推广应用，具有较高的经济效益和社会效益。

本发明公开一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其应用，本发明通过回补底盘菌DPA11已经敲除的ilvA基因，利用起始密码子TTG替换ilvE的起始密码子GTG，利用Trc启动子替换serA、glyA、ilvB、ilvN、pntA、pntB和cyo的原始启动子，再在质粒上异源过表达来源于谷氨酸棒状杆菌的panB和panC，得到D‑泛酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，该菌株在摇瓶水平上D‑泛酸的产量达到了6.81g/L，是原始出发菌株的3.83倍，并且避免了外源添加异亮氨酸，节约成本，同时发酵罐放大培养节约大量的时间成本。

本发明公开了一种重组基因工程菌及其发酵产香兰素的应用，所述重组基因工程菌是由耐受香兰素或阿魏酸的基因导入宿主菌构建而成，所述耐受香兰素或阿魏酸的基因包括周质膜融合蛋白AcrA基因、内膜转运蛋白AcrB基因或外膜蛋白TolC基因中的一种或多种；所述宿主包括含ech基因和fcs基因的大肠杆菌。本发明所述重组基因工程菌E.coli BW25113::PegYB::pACYCDuet‑acrAB‑tolC可利用阿魏酸为底物生产香兰素，香兰素最高产量为2335mg/L。采用本发明的方法发酵产生的发酵液中含有更高的香兰素，具有很好的应用前景。

本发明涉及一种高产赤霉素GA3的藤仓赤霉基因工程菌、构建方法及应用。本发明采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术敲除筛选标签的相关基因(pyrG)和代谢路径的调节基因(meaB)，并且过表达前体供应基因hmgR的催化基团编码序列thmgR，构建得到高产菌株F.fujikuroi RE:pyrG GpdA‑tHmgRΔmeaB，该菌株经过168h发酵培养基发酵后能积累2.35g/L的GA3产物。本发明提供了高产GA3的藤仓赤霉菌基因工程菌及构建方法，经过改造后的藤仓赤霉菌削弱了前体合成的反馈抑制，提高了代谢过程的前体供给，解除了GA3相关合成基因的转录抑制，相对于出发菌株能更高效的进行GA3的发酵生产，并且产量从2.0g/L提高到2.35g/L，为工程菌株的构建提供了可行的路线。

本发明公开了采用关键酶SrfAD和YbdT协同提高芽孢杆菌高产表面活性素的基因工程菌，所述基因工程菌以贝莱斯芽孢杆菌突变株ΔRapF+SerA为出发菌株，将SrfAD和/或YbdT关键限速酶基因的转化到贝莱斯芽孢杆菌突变株ΔRapF+SerA所得。本发明构建得到基因工程菌ΔRapF+SerA+SrfAD和ΔRapF+SerA+SrfAD+YbdT在发酵条件下用于高效生产表面活性素产量，两个关键限速酶基因的组成型表达，成功地将表面活性素进一步提高，在最佳培养基条件下，在5L发酵罐40‑50h可稳定生产表面活性素约18.2g/L与19.6g/L，该基因工程菌为加速表面活性素的产业化提供原材料。

本发明公开了具有高效分泌表达非洲猪瘟病毒关键抗原P72的基因工程菌及其构建方法和应用，基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株，将编码蛋白酶yow、AprE、NprE的信号肽核苷酸序列分别与优化改造的编码抗原P72的核苷酸序列进行融合构成新的融合基因SyP72、SAP72、SNP72转化到解解淀粉芽孢杆菌中得到三株基因工程菌株。本发明构建的最优工程菌株在优化的培养基中进行发酵培养，采用SDS‑PAGE电泳和Western Blot在发酵液中成功检测到重组抗原P72表达，蛋白含量达到4.5mg/mL；经口服和灌胃实验，表达的重组抗原P72能有效刺激小鼠P72抗体的产生。

本发明公开了SerA和/或FliZ在调控杆菌霉素L产量中的应用以及构建的基因工程菌，本发明通过敲除或者失活贝莱斯芽孢杆菌中SerA和/或FliZ编码基因提高贝莱斯芽孢杆菌杆菌霉素L产量，其中基因工程菌以贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314为出发菌株，敲除或者失活菌株基因组中负调控SerA和/或FliZ基因所得。本发明的基因工程菌株发酵生产杆菌霉素L的产量是菌株CPLK1314的12倍，在5L发酵罐优化培养基中48h可稳定生产杆菌霉素L，产量达到3.67g/L。该杆菌霉素L高产基因工程菌及其构建方法为加速杆菌霉素L的产业化提供原材料。

本发明涉及一种2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌是由苏云金芽胞杆菌BMB171基因组中敲除2‑甲基柠檬酸脱水酶基因prpD而得到的。本发明还提供了上述2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌的构建方法，以苏云金芽胞杆菌BMB171为出发菌株，利用基于归巢内切酶I‑SceI诱发染色体同源重组机制的基因敲除体系成功获得2‑甲基柠檬酸脱水酶(PrpD)基因无痕缺失突变株ΔprpD。通过液相色谱和质谱的检测发现，与出发菌株BMB171相比，ΔprpD菌株胞内2‑甲基柠檬酸浓度提高了217倍，且与化学法合成的2‑甲基柠檬酸相比，本发明法所产生的2‑甲基柠檬酸空间构型专一。

本发明涉及一种木糖醇基因工程菌及其混合转化生产木糖醇的方法，涉及生物技术领域。本发明提出构建一种木糖醇基因工程菌E.coli BL21-xdh06，该工程菌是通过PCR方法，从氧化葡糖杆菌 (Gluconobacter oxydans)获得木糖醇脱氢酶（xylitol dehydrogenase，XDH）基因xdh，将其克隆并在宿主菌E.coli BL21进行稳定高效表达。该基因工程菌表达的木糖醇脱氢酶，其酶活性提高了10倍，利用该基因工程菌和氧化葡糖杆菌混合静止转化D-阿拉伯糖醇生产木糖醇，D-阿拉伯糖醇的转化率由29%提高到91.6%。