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本发明公开了一种利用化学‑酶法生产L‑草铵膦的方法，所述方法为：以外消旋N‑乙酰草铵膦为底物，以含羧肽酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎后提取的纯酶为催化剂，以pH值为5～10的缓冲液为反应介质，在45℃水浴摇床200rpm条件下反应，反应完全后，获得含D‑N‑乙酰草铵膦和L‑草铵膦的反应液，将反应液分离纯化，收集D‑N‑乙酰草铵膦消旋化后用于循环拆分，同时获得L‑草铵膦。本发明方法不需要辅酶循环系统及与产物结构相似的氨基供体，反应步骤简单，易于分离，光学选择性高(ee值99％)，离子交换柱分离效果明显，更易得到高纯度的L‑草铵膦(纯度为98％)。

本发明公开了一种L-草铵膦化学酶法生产方法。本发明通过对来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的野生型酰胺酶基因进行突变并表达，获得了高活力、立体选择性严格的酰胺酶突变体，并利用树脂吸附制备了固定化酰胺酶。利用酰胺酶全细胞或固定化酶不对称催化N-苯乙酰-D,L-草铵膦合成L-草铵膦合成L-草铵膦，酶反应后的N-苯乙酰-D-草铵膦经一步加热消旋化可重新生成外消旋N-苯乙酰-D,L-草铵膦，大幅提高了手性拆分的原子利用率，使酰胺酶催化N-苯乙酰-D,L-草铵膦合成L-草铵膦路线的理论收率达到100％，为L-草铵膦的高效化学酶法合成奠定了基础。并通过。

本发明公开了一种生物酶法去消旋化制备L‑草铵膦的方法、草铵膦脱氢酶突变体及应用。一种生物酶法去消旋化制备L‑草铵膦的方法，以D,L‑草铵膦为原料，经多酶催化体系催化获得L‑草铵膦，所述酶催化体系包括用于将D,L‑草铵膦中的D‑草铵膦催化为2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸的D‑氨基酸氧化酶、以及用于将2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸催化还原为L‑草铵膦的草铵膦脱氢酶突变体，所述草铵膦脱氢酶突变体由野生菌Thiopseudomonas denitrificans中的草铵膦脱氢酶突变所得，突变位点为：V377S。本发明草铵膦脱氢酶突变体具有更好的催化效率，以外消旋D,L‑草铵膦为底物进行催化反应时，转化率远高于野生型酶，PPO产率也大幅提升。