本发明公开了一种可常温运输的环介导等温扩增试剂、制备方法及应用,该试剂包括Bst DNA Polymerase、dNTP、引物混合物、指示剂、保护剂和气溶胶污染预防剂;将上述组分混合,在‑70~‑80℃下冷冻干燥8~16h,即可得环介导等温扩增试剂。本发明制备了一种用于核酸检测的环介导等温扩增试剂,能够常温运输保存,运输方便,稳定性好;同时解决了气溶胶污染限制了LAMP技术推广的问题,大大降低了LAMP技术的应用和推广难度。试剂中Bst DNA Polymerase活性为150%,可常温保存一年以上,使用时仅需加入缓冲液即可,操作简单,DNA聚合酶活性高,检测灵敏度无损失,保护剂干扰小,成本低廉。
本发明公开了一种环介导等温扩增法检测苜蓿根腐病菌的引物及方法,所述引物包括一组外引物F3/B3和一组内引物FIP/BIP,所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.1‑4所示。所述方法包括:提取待测样品DNA;以DNA为模板,采用所述的引物进行LAMP等温扩增;在LAMP扩增产物中加入荧光染料进行显色,观察LAMP扩增产物的颜色,对产物进行分析,判断是否存在苜蓿根腐病菌。所述的引物及其快速LAMP检测方法可在生产实践中对苜蓿根腐病菌进行快速、灵敏、准确的检测,同时可用于田间病害的早期诊断和病菌的监测和鉴定,并且操作简便易行,为苜蓿根腐病的防治提供可靠的技术和理论依据。