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一种基于测定p38MAPK蛋白表达以检测斑马鱼M3受体蛋白的方法，包括以下步骤：(1)斑马鱼脑部组织蛋白样品的制备；(2)SDS凝胶电泳；(3)转膜；(4)封闭；(5)一抗、二抗孵育；(6)显色反应；(7)计算M3受体变化结果。本发明克服了传统斑马鱼M3受体检测受制于无针对性抗体而无法使用蛋白质免疫印迹技术之缺陷，首次提出使用p38MAPK磷酸化水平从而测定斑马鱼M3受体蛋白含量变化，该方法灵敏度高、稳定性好、不需要复杂设备；同时本发明操作简单快捷、特异性高、成本低，本发明从分子方面研究胆碱能系统的内在作用机制，再结合斑马鱼行为变化方面的研究，最终能够实现对水质的实时在线评估与监测。