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本实用新型公开了一种用于酵母双杂交菌落定位的简易定位器，涉及分子生物学实验器材技术领域，包括包括高压塑料环，所述高压塑料环内侧开设卡槽，所述高压塑料环两侧设置弹性夹紧组件；所述弹性夹紧组件包括固定设置于高压塑料环两侧的弹性塑料片；所述高压塑料环的卡槽内卡设标记卡片；高压塑料环内侧开设的卡槽用于固定标记卡片，两侧设置由弹性塑料片构成的夹紧组件以固定不同规格培养皿；该定位器通过标准化坐标标记解决了传统菌落定位方法精度低、易出错的问题，具有结构简单、操作便捷、成本低廉等优点。其轻量化设计和可更换标记卡片系统使实验过程更加灵活高效，特别适用于高通量酵母双杂交筛选系统中的菌落定位工作。