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本发明提供了一种针对家蚕MSG和PSG表达基因的可控编辑方法，其通过GAL4/UAS系统，分别构建了若干个在家蚕MSG中特异启动表达的GAL4表达载体和多个在家蚕PSG中特异启动表达的GAL4表达载体，通过将表达Cas9基因序列与U6驱动表达的gRNA靶点一起串联在UAS序列下游，最终构建成UAS表达载体，进而利用GAL4/UAS遗传操作工具达到家蚕基因的可控编辑。本发明根据家蚕基因组序列数据库中家蚕基因的序列密码子偏好性，对Cas9蛋白的基因序列进行了优化设计，使Cas9基因更有利于在家蚕丝腺中高效表达。本发明利用该可控的基因编辑技术可精准研究家蚕丝腺基因的功能和创制更多的生物遗传资源。

本发明属于蚕及蚕丝技术领域，公开了一种通过基因组编辑技术提高蚕丝产量和优化家蚕品种的方法，包括：let-7 microRNA的sgRNA转基因表达载体、sgRNA表达品系筛选，let-7敲除品系筛选，敲除形式鉴定，let-7敲除后对丝腺长度、重量和茧重进行统计分析。本发明将sgRNA表达品系与中部丝腺、后部丝腺Cas9表达品系分别进行了杂交，获得了let-7在中部丝腺特异敲除品系[Δlet-7-MSG]和let-7后部丝腺特异敲除品系[Δlet-7-PSG]；敲除品系家蚕的丝腺发育和产丝量都会受到影响。

本发明公开了家蚕中敲除seroin2基因表达在制备家蚕散卵品系中的应用及方法，敲除Seroin2基因表达使用敲除Seroin2基因的家蚕双元转基因系统，所述系统包括基于piggyBac的Cas9表达载体和靶标Seroin2基因的sgRNA表达载体；敲除Seroin2基因后能够降低卵胶的产生，获得散卵品系，对降低家蚕制种成本具有重要意义。

本发明涉及分子生物学领域，本发明公开了一种基于TRV的CRISPR/Cas12a基因组编辑载体构建方法：利用质粒pTRV2e3构建表达Cas12a蛋白和表达Cas12a蛋白并转录crRNA载体，并通过重组病毒TRVe3在植物中表达Cas12a蛋白和转录crRNA，对靶标基因进行定点编辑。本发明利用病毒TRVe3在表达外源蛋白速度快与含量高的特点对寄主植物的靶标基因进行定点编辑。