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本发明公开了一种RNA三螺旋水凝胶用于三阴性乳腺癌靶向治疗的制备方法。所述载体为纯RNA体系，通过滚环转录的方式形成，在转录复制过程中产生治疗型基因CXCR4，还杂交另外两条治疗型microRNA:肿瘤抑制的microRNA和oncomiR抑制剂；在直链模板上设计有可以靶向MDA‑MB‑231细胞的核酸适体的互补序列，在所述的核酸适体的互补序列上设计有胆固醇，高速离心后形成RNA水凝胶。该RNA三螺旋水凝胶成功应用于药物缓释体系，生物相容性较好，且三螺旋结构的加入使该RNA水凝胶可同时递送三种治疗型基因，对靶向性细胞MDA‑MB‑231肿瘤细胞的抑制生长作用及生物医药等领域具有广阔前景。