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本发明公开了从乳酸合成纯聚乳酸的大肠杆菌工程菌及其制备方法和应用，大肠杆菌工程菌构建了由丙酰辅酶A转移酶突变体基因和聚羟基脂肪酸酯合成酶突变体基因融合表达构成的聚乳酸合成途径而获得。本发明并能够实现在生物体内以乙酰辅酶A为起始代谢物向聚乳酸的转化。本发明提供的突变体菌株内表达本发明提供的编码组成聚乳酸合成代谢途径中所有的酶的基因获得。本发明所构建的重组大肠杆菌菌株在兼性厌氧的条件下可利用含葡萄糖或甘油的丰富培养基为原料合成16％细胞干重。

本发明公开了一种高产丙酮酸的解脂耶氏酵母工程菌、构建方法及应用，所述解脂耶氏酵母工程菌WSMHP是将解脂耶氏酵母基因组中草酰乙酸转运蛋白编码基因Oac1p敲除，同时过表达丙酮酸脱羧酶编码基因Pyc2和磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶编码基因Pck1。本发明提供的解脂耶罗酵母工程菌WSMHP与出发菌株解脂耶罗酵母出发菌株YW100‑1相比，以甘油为唯一碳源时，丙酮酸产量增加了39.0％，达到168.9g/L，为丙酮酸工业化生产提供了优良菌株。

本发明以大肠杆菌W3110为底盘细胞，通过代谢改造，得到L‑酪氨酸高产大肠杆菌WTY8菌株。在WTY8菌株中表达来源于拟南芥的芳香醛合酶基因，实现了在大肠杆菌能够以葡萄糖为底物从头合成酪醇，其成本低廉且产量高，有利于工业化的生产。

本发明公开了一种基于I型CRISPRi筛选系统构建的高产β‑丙氨酸工程菌及方法，通过敲除编码草酰乙酸到磷酸烯醇式丙酮酸的pckA基因以及编码L‑天冬氨酸到草酰乙酸的nadB基因，使得合成β‑丙氨酸的逆流途径被阻断，减少碳流失；通过ldhA基因和poxB基因敲除，增加合成丙酮酸的含量；通过过表达NCgl0580基因，提高EcN对产物的耐受性；通过敲除基因组中lacI基因，减少了发酵过程诱导剂的添加成本；通过优化I型CRISPRi系统高通量筛选工程菌中影响β‑丙氨酸产量的目标基因，显著提高了筛选效率和准确性，获得可提高β‑丙氨酸产量的天冬氨酸tRNA连接酶基因aspS，通过过表达aspS，增加了PanD酶活，进一步提高了β‑丙氨酸产量。

本发明公开了一种无外源氨基酸作用下高产L‑甲硫氨酸的重组大肠杆菌及其应用，所述重组大肠杆菌以赖氨酸途径敲除的L‑甲硫氨酸高产菌株E.coliW3110M2/pAm为出发菌株，在基因组上对lysA基因进行原位回补，并将lysA基因的启动子替换为PfliA启动子，再在pAm的质粒上过表达gltA基因和malY基因获得的；本发明菌株在发酵过程中无需外源添加必需氨基酸也可以生长良好，降低了发酵成本，解决了发酵过程中必需氨基酸添加时机的不确定性，降低了发酵调控的操作难度，使摇瓶中L‑甲硫氨酸产量从添加赖氨酸获得的2.44g/L提高至无外源氨基酸添加时的2.96g/L。

本发明公开了麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中重建麦角硫因代谢途径中的应用及其方法，麦角硫因合成基因包括Egt1和Egt2，对Egt1和Egt2基因进行密码子优化，优化后Egt1的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，Egt2的核酸序列如SEQ ID NO.2所示；然后以高产组氨酸的谷氨酸棒杆菌为出发菌株，将Egt1和Egt2转入谷氨酸棒杆菌中，实现以葡萄糖为碳源的从头合成麦角硫因。

本发明涉及工程菌株构建技术领域，特别涉及一种利用甘油发酵生产苯酚的工程菌株的构建方法，在pTrc99a载体中分别插入序列表中序列2、3的碱基序列，得到的重组质粒，将重组质粒电转化ATCC31884菌株，获得利用甘油发酵生产苯酚的工程菌株。本发明构建的菌株高效表达酪氨酸苯酚裂解酶和苯丙氨酸4‑单加氧酶，所得的大肠杆菌工程菌株利用甘油生产苯酚的含量达到21.30‑57.66mg/L，从而实现了生物法发酵甘油生产苯酚，降低了苯酚的生产成本，提高了经济效益。

本发明公开了一种基于辅因子代谢工程策略改造蛹虫草菌提高虫草素产量的方法及应用。本发明利用根癌农杆菌介导遗传转化技术将过表达葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶编码基因gsdA和/或6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶编码基因gndA的重组载体导入蛹虫草中，构建蛹虫草重组菌株，强化了胞内NADPH的供应，经液体深层发酵虫草素发酵产量显著提高。过表达gsdA的重组菌株液体发酵第20d虫草素产量达到了191.95mg/L，较野生型蛹虫草产量提高150.86％；过表达gndA的重组菌株液体发酵第20d虫草素产量达到了764.48mg/L，较野生型蛹虫草产量提高1034.02％。本发明提出的基于辅因子代谢工程策略改造蛹虫草菌构建重组工程菌株的方法，为高产虫草素的蛹虫草菌株的选育提供了新的方向。