专利交易市场

本发明属于家蚕基因工程和人工育种技术领域，公开了一种sgRNA及转基因表达载体、表达品系、筛选方法。利用CRISPR/Cas9系统，首先建立一个表达let-7Complex/Cluster(let-7C)敲除所用sgRNA的品系，将该品系与特定Cas9表达品系进行杂交，实现let-7C在家蚕丝腺中的敲除；将sgRNA表达品系与中部丝腺、后部丝腺Cas9表达品系分别进行杂交，获得let-7C在中部丝腺特异敲除的品系和let-7C后部丝腺特异敲除品系。本发明通过CRISPR/Cas9对家蚕丝腺let-7进行敲除，能促进丝腺的发育，增加丝蛋白的表达并提高家蚕的蚕丝产量。

本发明涉及基因编辑技术在治疗癌症中的应用。本发明通过针对VEGF靶点设计gRNA，在乳腺癌细胞中特异性的敲除了VEGF基因，通过蛋白检测发现敲除效果较好，VEGF蛋白得到了很好的抑制。此外，所述VEGF基因敲除后的乳腺癌细胞再联合PD‑1单克隆抗体治疗后，乳腺癌肿瘤得到了更好的抑制，具有较好的治疗效果。

本发明公开了一种用于构建基因缺失型拟南芥突变体植株的向导RNA、拟南芥突变体植株及其制备方法，所述向导RNA包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的一对序列。所述制备方法包括：根据向导RNA设计引物对；采用所述的引物对进行PCR扩增、纯化、酶切后，与载体连接后获得重组质粒；采用重组质粒转化感受态细胞后筛选、验证，获得用于敲除拟南芥中待敲除基因的表达载体；将获得的表达载体转化农杆菌并浸花后，筛选得到拟南芥突变体植株。本发明的技术方案克服了目前植物育种等性能上的不足，能够将拟南芥的抽薹期提前，为拟南芥在植物育种方向上提供了重要价值。